产品目录

本产品是一种用于采集血液样品时，仅需室温操作，即可迅速抑制RNase并稳定保存血液样品中RNA的无毒无害液态试剂。本产品适用于普通新鲜血液样品中RNA的稳定和保存，更加适合样品收集后不能够立即进行RNA抽提(包括miRNA等小RNA)的情况，特别适用于野外或临床采集的样品、大批量采集的血液样品和不能立即冻存的血液样品RNA的稳定与保存。抽提得到的病毒RNA可用于反转录、RT-PCR、qPCR、Northern、点杂交(Dot Blot)、纯化mRNA、体外翻译、RNase protection30 assay、cDNA克隆等下游实验；也可用于基因表达芯片分析、高通量测序等对RNA质量要求较高的情况。

本产品也可用于血液样品中蛋白和DNA的稳定和保存，但血液RNAstable试剂会导致蛋白变性，后续可进行Western blot、SDS-PAGE等实验，而不适用于检测酶活力等须保持蛋白活性的实验。

• 本产品的使用效果和液氮冻存的效果一致。本产品可以迅速渗透到血液细胞内部，完全抑制RNase，避免RNA降解，保持血液样品RNA的完整性，从而完美保存血液细胞的基因表达谱和细胞外的RNA谱，并且和液氮一样可以长期保存样品中的RNA。
  
• 本产品安全便捷。本产品无任何毒性和刺激性，可室温使用，确保了使用时的安全和便捷。和使用液氮相比，可以有效避免因使用超低温的液氮而可能引起的冻伤、离心管爆裂等安全隐患，并且携带、运输非常方便。
  
• 本产品可稳定血液样品的RNA表达谱。常见的血液样品保存方式是4℃短时间保存，但此时血液中细胞的生命活动还在进行，基因表达谱还会发生变化，RNA提取时与血液样品收集时的基因表达谱很可能已经出现显著差异，这种显著的差异很可能会导致实验结果的不确定性。而使用血液RNAstable试剂保存后，血液中细胞的生命活动几乎立即被终止，RNA谱也被固定，且RNA完整性更佳(图1B)。经测试，直接将全血置于-80℃条件下保存会导致部分RNA降解(图1B)，可能原因是在冻存和解冻过程中细胞受到破坏，细胞内的RNase释放而导致部分RNA降解。因此，不建议直接将全血置于-80℃条件下保存。

在本产品中样品的保存时间和存储温度相关，例如37℃可保存1～2天，室温可保存一周，4℃可以保存1个月，-20℃或更低温度可以更长时间保存。具体如下表所示：

存储温度	37℃	25℃	4℃	-20℃或更低温度
保存时间	1～2天	1周	1个月	＞6个月

本制品对于小鼠血液样品的保存效果如图1所示。全血样品用本产品分别在4℃分保存30天、室温保存7天以及37℃保存1天后，抽提获得的RNA与新鲜样品(Control,ctrl)一样均能够保持完整性，几乎无降解；而直接将血液在25℃保存7天，大部分RNA都已经被降解(图1A)。在4℃条件下保存，血液RNAstable试剂的保护效果更好；而直接将全血置于-80℃条件下保存，3天时RNA已有部分降解，但血液RNAstable试剂保护的样品几乎无降解。



图1．RNAstable血液RNA稳定保存液对于小鼠全血中RNA的稳定保存效果图。按照图中所示条件保存后，使用百奥莱博的柱式动物RNA提取试剂盒(货号：YTB4004)抽提RNA，随后取相同体积的RNA样品进行电泳。其中图A为RNA样品变性处理后，在含6.67%甲醛和适量NadRed(货号：YT015)的1%变性琼脂糖凝胶中进行电泳检测，图B为含NadRed的1%琼脂糖凝胶电泳检测。本图仅供参考。

组分	100mL	500mL
RNAstable血液RNA保存液	100mL	500mL
说明书	1份	1份

保存：室温或4℃，有效期2年。


按照每200μL血液样品使用1mL本产品来计算，本产品100mL包装可以用于约100份血液样品的保存，500mL包装可以用于约500份血液样品的保存。

• 本产品适合新鲜血液的保存，血液样品获得后需要尽快使用本产品保存。
  
• 样品如果需要-20℃或-80℃长期保存，应先置于4℃保存过夜或更长时间后才能再转移至-20℃或-80℃保存，以保证血液RNAstable试剂充分有效地完全渗透血液细胞内部。
  
• -20℃或-80℃保存情况下，样品解冻时血液RNAstable试剂中可能有结晶析出，属正常现象，可待结晶完全溶解后使用，不会影响后续RNA的抽提效果。
  
• 所有自行准备的试剂和耗材也都应是RNase-free。如果可能有RNase污染，可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后高温高压灭菌并烘干。操作时应避免对着样品或所使用的试剂盒耗材呼气或说话，以防RNase污染。建议戴一次性口罩操作。
  
• 对于操作环境中RNA酶的去除，推荐使用百奥莱博的核酸酶喷雾清除剂(货号：YT400)以去除实验桌面上或其它接触面上的RNase。

• 对于全血样品
  
  • 全血的收集：收集100～300μL新鲜的血液样品，加入含抗凝剂的抗凝管中，颠倒混匀。抗凝剂推荐使用EDTA钠盐或钾盐，肝素和柠檬酸盐也可以。
    
  • 保存：按照1:5的比例加入血液RNAstable试剂，例如200μL的血液加入1000μL的血液RNAstable试剂，颠倒混匀。此时血液样品在室温可以保存一周，4℃可以保存一个月，4℃保存(过夜或更长时间)后转移至-20℃或-80℃可以至少保存6个月。
    
  • NA抽提时样品的处理：RNA抽提前，加入等体积的DEPC水(DNase、RNase free)或其它适当的不含RNase的水，混匀，10000×g室温离心5分钟，小心去除上清。沉淀物或剩余体积按照1:3的比例加入柱式动物RNA提取试剂盒(货号：YTB4004)中的裂解液，如200μL的沉淀物或剩余体积加入600μL的裂解液。随后按照步骤3或柱式动物RNA抽提试剂盒使用说明进行总RNA的提取。也可以使用其它RNA抽提试剂盒中裂解液或Trizol LS等并按其说明书进行总RNA的抽提。如果希望同时抽提细胞内和细胞外的RNA，直接按照1:3的比例加入柱式动物RNA抽提试剂盒中的裂解液，例如200μL含血液RNAstable试剂的样品加入600μL的裂解液。随后按照步骤3或柱式动物RNA抽提试剂盒使用说明进行总RNA的提取。也可以使用其它RNA抽提试剂盒中裂解液或Trizol LS等并按其说明书进行总RNA的抽提。
  
  
• 对于白细胞样品
  
  • 白细胞的收集：取100～300μL新鲜的血液样品，加入含抗凝剂的抗凝管中，颠倒混匀。1500～2000×g，4℃离心10～15分钟。此时可见管中的液体分3层，上层为淡黄色血浆，底层为红细胞，在紧贴红细胞层上有一层灰白色的白细胞。吸掉上层的血浆，小心收集白细胞至新的离心管中，然后加入1mL PBS (货号：YTB1103)洗涤，5000×g 4℃离心2分钟，小心吸除PBS，由于白细胞比较少，可以适当残留微量液体。
    
  • 保存：小心加入100～200μL的血液RNAstable试剂，避免吹散沉淀。此时的白细胞样品在室温可以保存一周，4℃可以保存一个月，4℃保存(过夜或更长时间)后转移至-20℃或-80℃至少可以保存6个月。
    
  • RNA抽提时样品的处理：
    方法1：直接按照1:3的比例加入柱式动物RNA提取试剂盒(货号：YTB4004)中的裂解液，例如200μL含血液RNAstable试剂的样品加入600μL的裂解液。随后按照步骤3或柱式动物RNA抽提试剂盒使用说明进行总RNA的提取。也可以使用其它RNA抽提试剂盒中裂解液或Trizol LS等并按其说明书进行总RNA的抽提。本方法简单，抽提获得的总RNA质量尚可，得率高，几乎没有损失，但由于没有去除血液RNAstable试剂，纯度上可能会稍差一些。
    方法2：加入等体积的DEPC水(DNase、RNase free)或其它适当的不含RNase的水，10000×g室温离心5分钟，小心去除上清，由于白细胞比较少，可以适当残留微量液体，然后加入柱式动物RNA提取试剂盒(货号：YTB4004)中的裂解液300μL。随后按照步骤3或柱式动物RNA抽提试剂盒使用说明进行总RNA的提取。也可以使用其它RNA抽提试剂盒中裂解液或Trizol LS等并按其说明书进行总RNA的抽提。本方法稍复杂，由于通过离心去除了血液RNAstable试剂，纯度好，但在离心过程中可能会损失部分白细胞。
  
  
• 血液样品总RNA的抽提
  对于使用百奥莱博柱式动物RNA提取试剂盒(货号：YTB4004)裂解液和抽提试剂盒的样品，建议按照以下步骤进行总RNA的抽提，或参考产品使用说明。其它RNA抽提试剂盒如Trizol LS等请按其说明书进行总RNA的抽提。
  
  • 加入等体积结合液至裂解液中，轻轻颠倒混匀3～5次。此时可能会有沉淀物产生，属于正常现象。
    
  • 将混合物(包括沉淀物)转移至纯化柱内，12000×g离心30秒，倒弃收集管内液体。
    注意：当裂解液的体积大于300μL时，在加入等体积结合液后，总体积会超过纯化柱的容量，这时应分成2次过柱，即将一半的混合物过柱后，再将剩余的混合物重复步骤b一次。
    
  • 加入600μL洗涤液I，12000×g离心30秒，倒弃收集管内液体。
    
  • 加入600μL洗涤液II，12000×g离心30秒，倒弃收集管内液体。
    
  • 重复步骤d一次。最高速(约14000～16000×g)离心2分钟，去除残留的液体。
    
  • 将RNA纯化柱置于本试剂盒提供的RNA洗脱管中，加入30～50μL洗脱液，室温放置2～3分钟，最高速离心30秒，所得溶液即为纯化的RNA。用分光光度计测浓度。本试剂盒抽提得到的RNA的A260/A280通常为2.0-2.2。A260/A230通常为1.9-2.1。
    注意：洗脱液需要加到纯化柱柱面中央，使其被完全吸收。如需获得更高浓度的样品，可把洗脱液的体积减小至20μL，但洗脱下来的RNA量会相对减少。室温较低时，洗脱液在37℃预热片刻对得率有所帮助。此外，洗脱后的溶液再次加回到原纯化柱再离心洗脱一次，可提高得率约10～30%；或者在第一次洗脱后使用新的洗脱液再洗脱一次，会获得约为第一次洗脱量15～40%的RNA。

相关搜索：血液RNA保存液，全血RNA保存液，血液RNA稳定保存液，常温RNA保存液，非冻型血液RNA保存液，血液RNAstable，RNAstable Blood RNA Stabilization Reagent